| 1 - Servicios de laboratorio |
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GRUPO ABO Y RH(D)
• ABO
Mediante prueba globular, enfrentando los hematíes a estudiar a reactivos anti A, anti B y anti AB y prueba sérica que enfrenta el suero a estudiar con hematíes A1 y B.
• Rh(D)
Utilizando dos reactivos anti D monoclonales para detectar la variante más frecuente: DVI.
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4.2.- DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS (X ANTÍGENO COMÚN)
Utilización de reactivos monoclonales para los antígenos Rh (C, c, D, E, e), Kell (K) y Kidd (Jk a y b).
Para la tipificación del resto de antígenos comunes se utilizan los reactivos más específicos y sensibles.
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4.3.- DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS (X ANTÍGENO PÚBLICO/PRIVADO)
Utilización de reactivos específicos comerciales o propios obtenidos de personas sensibilizadas y estudiadas en el laboratorio de inmunohematología del BST o por intercambio de colaboración con otros centros de referencia.
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4.4.- TIPIFICACIÓN MOLECULAR RhD/CE, DUFFY Y OTROS SISTEMAS DE GRUPO SANGUÍNEO
A partir de DNA obtenido de sangre o líquido amniótico, utilizando técnicas de PCR.
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4.5.-RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS COMPLEJOS EN LA DETERMINACIÓN DEL GRUPO ABO, RH U OTROS
El diagnóstico serológico de subgrupos débiles de los antígenos ABH, de variantes o modificaciones de la expresión de otros antígenos eritrocitarios o de dobles poblaciones no transfusionales supone la utilización de una o varias de las siguientes estrategias:
• Adsorción-elución de anticuerpos y estudio del eluido.
• Investigación de la presencia de los antígenos estudiados en otros componentes orgánicos diferentes de los hematíes: saliva, plasma, etc.
• Utilización de anticuerpos monoclonales para la separación de poblaciones eritrocitarias.
• Utilización de anticuerpos policlonales o monoclonales para detectar e identificar variantes de los diferentes antígenos: B adquirido, D, Kell, Duffy, etc.
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4.6.- PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD)
Se utilizan dos antiglobulinas diferentes polivalentes IgG+C3d.
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4.7.- ESTUDIO DE UNA MUESTRA CON UNA PAD POSITIVA DE BAJA COMPLEJIDAD
Incluye los estudios siguientes:
• PAD realizada con reactivos monoespecíficos.
• Titulación de la PAD con el/los reactivo/s monoespecífico/s.
• Grupo ABO, Rh y tipificación de los antígenos Kell, Kidd a y b con reactivos monoclonales
• En caso de transfusión reciente, separación de la fracción rica en neocitos para realizar la tipificación de los antígenos mencionados.
• Estudio del eluido obtenido de los hematíes del enfermo en las condiciones necesarias para detectar anticuerpos de la clase encontrada en la PAD.
• Estudio del suero utilizando el panel de hematíes en una técnica de la antiglobulina.
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4.8.- ESTUDIO DE UNA MUESTRA CON UNA PAD POSITIVA Y ANTICUERPO LIBRE EN EL SUERO
Incluye las determinaciones citadas en el apartado anterior y, además, el estudio del suero con el fin de descartar la presencia de aloanticuerpos clínicamente significativos mediante la realización de:
• Autoadsorciones con hematíes tratados con ZZAP o EDTA-Glicina y/o adsorciones diferenciales con una o varias muestras de hematíes conocidos, dependiendo de si ha sido posible la determinación de los grupos, del enfermo, Rh, Kell y Kidd.
• Estudio del suero adsorbido con el panel de hematíes utilizando una técnica de la antiglobulina.
Si se detecta C3d en los hematíes del enfermo: investigación de aglutininas frías y de anticuerpos de tipo IgM incompletos. Si se trata de una PAD de tipo IgG + C3d: investigación adicional de la subclase de IgG.
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4.9.- ESTUDIO DE UNA MUESTRA CON UNA PAD POSITIVA QUE PRESENTA DIFICULTADES SEROLÓGICAS COMPLEJAS
Incluye las determinaciones mencionadas en los dos apartados anteriores. La complejidad adicional está condicionada por alguna de las situaciones siguientes:
• autoanticuerpos que parecen aloanticuerpos
• identificación de aloanticuerpos en el eluido
• anticuerpos de baja afinidad
• presencia de anticuerpos dirigidos contra antígenos públicos
• presencia de anticuerpos relacionados con medicamentos
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4.10.- TÍTULO DE AGLUTININAS DE GRUPO ABO
Mediante la técnica de sedimentación a 22 ºC con diluciones dobles del suero.
La determinación del componente IgG se realiza con la técnica de la antiglobulina con el suero tratado con 2ME o DTT.
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4.11.- ESCRUTINIO DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Estudio del suero con un panel de 2 o 3 hematíes diferentes, ampliamente tipificados y complementarios, utilizando la técnica de la antiglobulina y, si es preciso, una técnica enzimática. |
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4.12.- IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES MONOESPECÍFICOS
Estudio del suero con un panel de identificación con control "auto", isogrupo y hematíes de sangre de cordón, utilizando la técnica de la antiglobulina en medio de baja fuerza iónica (con hematíes en medio salino y tratados con papaína) y la de papaína en dos tiempos.
Determinación de los antígenos del sistema contra el que va dirigido el anticuerpo detectado.
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4.13.- IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Incluye las determinaciones mencionadas en el apartado anterior y otras en relación con los resultados obtenidos.
En ocasiones, la identificación de especificidades simples requiere la realización de paneles a diferentes temperaturas y/o el estudio del suero con 2-ME o DTT.
También se considera un estudio complementario básico la titulación de un anticuerpo.
La previsión de nuevos requerimientos transfusionales puede hacer necesaria la determinación de los grupos sanguíneos Rh completo, Ss, Kell, Duffy y Kidd.
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4.14.- IDENTIFICACIÓN COMPLETA DE MEZCLAS DE ANTICUERPOS COMUNES
Con el fin de descartar o confirmar la presencia de diferentes anticuerpos, se utiliza una combinación de las siguientes estrategias:
• Tipificación completa de los hematíes obtenidos de la sangre total o de la fracción rica en neocitos.
• Utilización de diferentes paneles constituidos con muestras escogidas según las especificidades implicadas.
• Realización de adsorciones diferenciales.
• Neutralización del suero con sustancias solubles Lewis, P o plasma isogrupo.
• Tratamiento del suero con 2ME o DTT.
• Estudio del suero con reactivos antiglobulina especiales, por ejemplo, antiglobulina monoclonal sin componente anti-IgG4.
• Otras técnicas: prueba de la antiglobulina en medio albuminoso o con polietilenglicol (PEG), prueba de la antiglobulina con hematíes del panel tratadas con cloroquina.
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4.15.- RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS SEROLÓGICOS COMPLEJOS EN MUESTRAS QUE PRESENTAN UNA IDENTIFICACIÓN DE ALOANTICUERPOS POSITIVA
Quedan incluidos en este apartado los siguientes tipos de complejidad:
• Identificación de anticuerpos dirigidos contra antígenos de alta y/o baja frecuencia.
• Identificación de mezclas de anticuerpos comunes con otros dirigidos contra antígenos de alta y/o baja frecuencia.
• Identificación de anticuerpos relacionados con el sistema HLA.
• Identificación de autoanticuerpos que parecen aloanticuerpos.
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4.16.- PRUEBA CRUZADA
La prueba cruzada se hace enfrentando el suero del receptor con los hematíes de la unidad de hematíes a administrar mediante una técnica de la antiglobulina en medio de baja fuerza iónica.
En situaciones especiales se utilizan otros métodos: suero adsorbido, antiglobulina sin componente anti-IgG4, sangre tipificada para los antígenos comunes, etc.
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4.17.- PREVENCIÓN DE LA ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIÉN NACIDO: ESTUDIO DE LA MADRE
Se incluyen los estudios siguientes:
• Determinación del antígeno Rh(D) con reactivos que permiten detectar la variante DVI.
• Escrutinio de anticuerpos irregulares, utilizando una técnica con antiglobulina.
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4.18.- PREVENCIÓN DE LA ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIÉN NACIDO: ESTUDIO DEL RECIÉN NACIDO
Se incluyen los estudios siguientes:
• Determinación del grupo ABO y Rh(D).
• Prueba de la antiglobulina directa con reactivos polivalentes.
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4.19.- DETERMINACIÓN / CUANTIFICACIÓN DE HEMATÍES FETALES EN SANGRE MATERNA
Esta determinación se puede realizar a las madres Rh(D) negativo con hijo Rh(D) positivo para adecuar la administración del IgG anti-D a la cantidad de hematíes fetales presentes en la sangre materna.
También se puede efectuar en los casos de dobles poblaciones encontradas en la determinación de los grupos sanguíneos durante la gestación o en el momento del parto.
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4.20.- DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL ANTI-D (IgG)
Incluye la titulación del anti-D detectado en gestantes sensibilizadas. En caso de que el título sea superior a 1:16 en la técnica de la antiglobulina con hematíes CcDee en medio salino, se realiza una técnica cuantitativa de EIA, siempre que no se pueda hacer el estudio funcional. Todas las muestras se estudian por duplicado y en paralelo con la muestra anterior. La curva de calibración se determina con el anti-D estándar internacional.
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4.21.- DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA DE UN ANTICUERPO
Se realiza con la técnica de quimioluminiscencia con células mononucleadas obtenidas de donantes.
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4.22.- DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE RECIÉN NACIDOS CON UNA PAD POSITIVA POR SENSIBILIZACIÓN MATERNO-FETAL
En este apartado se incluyen las determinaciones siguientes:
• Confirmar la naturaleza de la PAD con reactivos antiglobulina monoespecíficos.
• Tipificación ABO y Rh(D).
• Estudio del eluido obtenido de la sangre de cordón con un panel adecuado al tipo de incompatibilidad fetomaterna.
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4.23.- panel DE ESCRUTINIO DE ANTICUERPOS AL 50% (3 ML)
Se trata de un panel constituido por 2-3 muestras de hematíes suspendidas al 50% en líquido de conservación.
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4.24.- HEMATÍES SENSIBILIZADOS CON IGG AL 3% (X ML)
Es una suspensión de hematíes sensibilizados con IgG que se utilizan para el control de la técnica de la antiglobulina.
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4.25.- CONTROL DE CALIDAD DE UNA ANTIGLOBULINA
Se efectúa la determinación del contenido (diluciones dobles progresivas) de anti-IgG, anti-C3b, anti-C3d y anti-C4 de una antiglobulina determinada. Se comprueba la ausencia de otros anticuerpos contaminantes. |
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4.26.- GENOTIPO HLA-B27
Determinación realizada por PCR-SSP.
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4.27.- FENOTIPO HLA-AB
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4.28.- GENOTIPO HLA-A Y/O B BAJA RESOLUCIÓN
Determinación realizada por PCR-SSP en muestras que presentan problemas de tipificación serológica por una escasa viabilidad celular, por especificidades complejas o por otros motivos.
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4.29.- GENOTIPO DE ESPECIFICIDADES HLA
Determinación de especificidades concretas realizada por PCR-SSP.
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4.30.- GENOTIPO HLA-DR BAJA RESOLUCIÓN
Determinación realizada por PCR-SSO en la variante de "reverse dot-blot" combinado o no con PCR-SSP. |
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4.31.- GENOTIPO HLA-DR ALTA RESOLUCIÓN
Determinación realizada por PCR-SSO en la variante de "reverse dot-blot" combinado o no con PCR-SSP.
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4.32.- GENOTIPO HLA-DQ ALTA RESOLUCIÓN
Determinación realizada por PCR-SSO en la variante de "reverse dot-blot" combinado o no con PCR-SSP.
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4.33.- IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS LINFOCITOTÓXICOS
Se efectúa en aquellas situaciones en que sea necesario: trasplante de órganos, citopenias neonatales, identificación de anticuerpos eritrocitarios, reacciones febriles no hemolíticas postransfusionales, transfusión ineficaz de plaquetas y en otras situaciones. Se utiliza una técnica de citotoxicidad.
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4.34.- PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD) EN PLAQUETAS
Se utiliza la técnica de inmunofluorescencia con plaquetas tratadas con paraformaldehido y antiglobulinas polivalentes y específicas anti-IgG, Ig-M y Ig-A.
Siempre se realiza un control negativo con plaquetas de personas sanas.
Antes de hacer la PAD se realiza una determinación de la cifra de plaquetas en muestra de sangre en EDTA y en citrato.
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4.35.- ESTUDIO DE AUTOANTICUERPOS ANTIPLAQUETAS
Incluye las determinaciones siguientes:
• cifra de plaquetas en muestra en EDTA y en citrato
• estudio de la PAD
• investigación de anticuerpos en el eluido obtenido de las plaquetas en estudio y en el suero con antiglobulinas polivalentes y monoespecíficas anti-IgG, anti-IgM y anti-IgA
• valoración del grado de afinidad del anticuerpo detectado
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4.37.- ESTUDIO DE UNA MUESTRA CON UNA PAD POSITIVA QUE PRESENTA DIFICULTADES SEROLÓGICAS COMPLEJAS
Incluye las determinaciones efectuadas en el apartado anterior y las especificadas a continuación:
• identificación de anticuerpos HLA y/o mezclas de anticuerpos en el suero
• estudio de anticuerpos dirigidos contra antígenos crípticos: EDTA y o PFA dependientes
• estudio de anticuerpos relacionados con medicamentos
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4.38. - ESCRUTINIO DE ANTICUERPOS ANTIPLAQUETAS
Este estudio se hace en los casos de reacción febril postransfusional no hemolítica y en citopenias neonatales, aplicando la técnica de inmunofluorescencia con plaquetas tratadas y sin tratar con cloroquina.
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4.39.- IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS ANTIPLAQUETAS MONOESPECÍFICOS
Mediante la utilización de un panel de plaquetas tipificadas por los sistemas HPA-1,-2, -3, y -5 en las técnicas de fase sólida y/o inmunofluorescencia.
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4.40.- IDENTIFICACIÓN DE MEZCLAS DE ANTICUERPOS
Incluye las determinaciones efectuadas en el apartado anterior, y con el fin de descartar o confirmar la presencia de mezclas de aloanticuerpos, se utiliza la técnica de MAIPA con diferentes anticuerpos monoclonales dirigidos contra las diferentes glicoproteínas de membrana.
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4.41. - RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS SEROLÓGICOS COMPLEJOS
En este apartado se incluye la presencia de:
• mezclas de auto y aloanticuerpos
• anticuerpos contra antígenos públicos
• anticuerpos dirigidos contra antígenos crípticos
• aloanticuerpos en el eluido
Con el fin de solucionar estas eventualidades se utiliza una combinación de las técnicas de fase sólida, inmunofluorescencia, MAIPA y linfocitotoxicidad. En ocasiones puede ser necesario realizar autoadsorciones y/o adsorciones diferenciales.
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4.42. - GENOTIPO DE LOS SISTEMAS HPA
Se hace a partir de DNA obtenido de sangre, líquido amniótico, cabello, etc.
La determinación se hace por PCR-SSP en sus variantes ASRA y/o SSP.
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4.43.- ESTUDIO DE GLICOPROTEÍNAS DE MEMBRANA
Utilizando anticuerpos monoclonales para evaluar posibles alteraciones en la expresión de glicoproteínas plaquetares en las técnicas de inmunofluorescencia o MAIPA.
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4.44.- panel DE ESCRUTINIO
Constituido por 2-3 muestras de plaquetas tipificadas por los sistemas HPA-1, -2, -3, y -5.
Para utilizar en la técnica de inmunofluorescencia (congeladas) o en la de MAIPA (en suspensión).
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4.45.- SUERO CONTROL POSITIVO
1 ml de suero HLA policlonal y poliespecífico para utilizarlo en la técnica de inmunofluorescencia.
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4.46.- ESTUDIO COMPLETO DE NEUTROPENIA
Generalmente se utiliza la técnica de inmunofluorescencia con granulocitos tratados con paraformaldehido. En ocasiones, la técnica empleada es la de aglutinación.
Se utilizan antiglobulinas polivalentes y específicas anti-IgG, IgM e IgA.
Estudio de la presencia de anticuerpos en el suero y el eluido.
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4.47.- ESCRUTINIO DE ANTICUERPOS CITOPLASMA DE LOS GRANULOCITOS, ANCA (ETANOL O FORMALINA)
Mediante la técnica de inmunofluorescencia sobre neutrófilos fijados en porta tratados con etanol o formalina.
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4.48.- IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE LOS ANCA
Mediante la técnica de EIA, específica para anticuerpos anti-PR3 y anti-MPO.
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4.49.- ESCRUTINIO DE ANTICUERPOS ANTIGRANULOCITOS
Esta investigación se realiza en los casos de reacción febril postransfusional no hemolítica y en citopenias neonatales, mediante la técnica de inmunofluorescencia y en ocasiones la de aglutinación.
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4.50.- IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS ANTIGRANULOCITOS
A través del estudio de la especificidad de anticuerpos detectados utilizando un panel de granulocitos tipificados por los antígenos NA, NB, ND y 5a.
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4.51.- GENOTIPO NA
Mediante el DNA obtenido de sangre, líquido amniótico, cabello, etc. utilizando la técnica de PCR-SSP.
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4.52.- TIPIFICACIÓN NB, ND O 5A
Mediante las técnicas de inmunofluorescencia o de aglutinación. Se utilizan reactivos obtenidos de personas sensibilizadas estudiadas en el laboratorio de inmunohematología del BST o por intercambio con otros laboratorios.
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4.53.- TIPIFICACIÓN FcRIII
Con la técnica de inmunofluorescencia con un anticuerpo monoclonal específico. |
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4.54.- ESTUDIO REACCIÓN FEBRIL POSTRANSFUSIÓN
Incluye la realización del escrutinio de anticuerpos antiplaquetas, antigranulocitos y antilinfocitos.
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4.55.- PRUEBA CRUZADA CON PLAQUETAS Y LINFOCITOS (X1 A 3)
Enfrenta el suero del receptor con las plaquetas y los linfocitos del donante mediante las técnicas de inmunofluorescencia y citotoxicidad.
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4.56.- SEGUIMIENTO DEL QUIMERISMO POST-TMO
Este estudio se hace en muestras pretrasplante del receptor y del donante y en muestras postrasplante del receptor.
Se basa en el análisis de marcadores polimórficos de tipo microsatélites de DNA (STR).
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4.57.- ESTUDIOS MOLECULARES ESPECIALES SEGÚN EL TIPO DE ESTUDIO
Estudio de mutaciones asociadas a fibrosis quística mediante la técnica de PCR-OLA.
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LIRAD