Identificación microbiana (MALDI-TOF)

Información técnica

Utilidad

Identificar un microorganismo a nivel de género y especie. La procedencia del microorganismo aislado puede ser un cultivo ambiental o bien un cultivo de componente sanguíneo, de leche, tejidos, terapia celular, terapia avanzada, etc.

Método

Existen varios métodos para identificar un microorganismo, los cuales pueden ser complementarios:

• Estudiar las características fenotípicas:

  • Morfología microscópica (tinción y observación al microscopio)

  • Metabolismo (pruebas bioquímicas)

  • Composición antigénica (estudios serológicos)

  • Composición biomolecular (MALDI-TOF)

• Estudiar las características genotípicas:

• Genoma (Secuenciación, PCR)

MALDI-TOF: De las siglas en inglés MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization) y TOF (Time-Of-Flight). MALDI-TOF es una técnica de ionización suave que impacta moléculas grandes con energía láser y libera fragmentos ionizados. El principio de medida se muestra en la ilustración 1 y 2.

La muestra a analizar se mezcla o se recubre con un compuesto orgánico que contiene una solución absorbente llamada matriz. La matriz funciona como absorbente de energía en la irradiación láser. Los compuestos de la matriz con el analito se depositan sobre una placa formada por un metal conductor. A continuación, con un haz láser, la muestra se ioniza. Las moléculas de la matriz se desorben y se ionizan energéticamente en presencia de un haz láser y generan las moléculas del analito en fase gaseosa. Los iones se aceleran y se separan en función de su masa y relación de carga. Las moléculas de iones de pequeño tamaño se aceleran más rápidamente que los iones de gran tamaño. A continuación, estos iones son detectados y se miden mediante el analizador de tiempo de vuelo (TOF).

El principio básico del analizador TOF es que determina el tiempo que requiere el ión en recorrer la longitud del tubo de vuelo. Los iones de pequeño tamaño y carga ligera viajan más rápido hacia el detector que los más grandes y pesados. La detección de los iones genera un espectro específico, el cual se compara con la base de datos para determinar cuál es la identidad del microorganismo.

Algoritmo diagnóstico

En caso de detectar crecimiento microbiano, se procede a realizar la identificación del microorganismo por MALDI-TOF. Por lo tanto, esta prueba se añade cuando el cultivo es positivo.

Resultados

El resultado esperado es la identificación a nivel de género y especie. En algunos casos se puede obtener solo la identificación a nivel de género. Si el microorganismo no está en la base de datos, se deben emplear otros métodos para realizar la identificación.

Precauciones

Es necesario disponer de un cultivo puro del microorganismo para identificarlo.

Tiempo de respuesta

• 1-2 días

Información sobre el espécimen

Muestra: Producto o cultivo ambiental

Tubos: Según el producto (ver las fichas de las pruebas de cada tipo de cultivo)

Estabilidad: Transportar tan pronto como sea posible al laboratorio.

Instrucciones de transporte: Temperatura ambiente.

Motivo de rechazo: Muestra no identificada, etiqueta ilegible, etc.

Información administrativa

Código BST: Identificación y antibiograma aerobio (61033) o Identificación y antibiograma anaerobio (61030)

Código BST antiguo: Identificación y antibiograma aerobio (7575) o Identificación y antibiograma anaerobio (7572)

Descripción de la prueba: Identificación y antibiograma aerobio, Identificación y antibiograma anaerobio

Sinónimos: Identificación microbiana, identificación de bacterias, identificación de hongos

Sección: Microbiología

Tarifa BST: Consulte las tarifas actualizadas aquí.

Perfiles
No aplica

Referencias

• Guide to the quality and safety of tissues and cells for human application. 5th edition EDQM, 2022

• Farmacopea Europea 11ena edició, 2023