Catálogo de pruebas

Diagnóstico molecular coagulopatías congénitas por NGS: Hemofilia A

Código: 70801

Tipo: Estudi de coagulopaties congènites

Información clínica

Utilidad diagnóstica:

Identificar el defecto molecular en el F8 en pacientes diagnosticados de HA.

Hemofilia A (HA)

La HA es la forma más frecuente de hemofilia con una prevalencia estimada de 1:5.000 hombres. Este trastorno hemorrágico está causado por una deficiencia de factor VIII (FVIII) de la coagulación. Según los niveles de FVIII se distinguen tres formas de HA: grave si la actividad biológica del FVIII es <1%; moderada si la actividad del FVIII está entre 1-5%; leve si la actividad del FVIII está entre 5-40%. Las manifestaciones clínicas más frecuentes son las hemorragias en las articulaciones (hemartrosis) y en los músculos (hematomas). La frecuencia y gravedad de los sangrados es inversamente proporcional a la cantidad de FVIII presente en el plasma.

La HA presenta una herencia recesiva ligada al cromosoma X, de manera que los hombres son afectados y las mujeres son portadoras de la patología. Este trastorno está causado por mutaciones en el gen que codifica la proteína FVIII de la coagulación (F8) que pueden afectar la actividad del FVIII de la coagulación o reducir la cantidad de esta proteína. Actualmente se han identificado más de 1.300 alteraciones genéticas en el F8, entre las cuales se incluyen cambios de un solo nucleótido y deleciones o inserciones de varios nucleótidos. No obstante, en los casos de HA grave la mutación más frecuente es la inversión del intrón 22, presente en un 50% de los pacientes. Esta mutación ocurre por una recombinación homóloga entre el F8 y el extremo telomérico del cromosoma X debido a la alta homología que existe entre ambas secuencias

Aplicación de un panel de múltiples genes que se basa en la amplificación simultánea de los exones y las regiones intrónicas adyacentes para su secuenciación mediante técnicas de secuenciación masiva (NGS) y permite realizar el estudio molecular simultáneo de los genes relacionados con las coagulopatías congénitas y trastornos hemorrágicos hereditarios, entre los que se encuentra el gen del factor VIII (F8).

Método:

Secuenciación masiva (NGS)

Análisis de las inversiones del intrón 1 mediante PCR convencional y del intrón 22 mediante PCR larga (LR-PCR) en el F8.

Secuenciación masiva de los exones y las regiones intrónicas adyacentes del F8 con la aplicación de un panel de genes relacionados con las coagulopatías congénitas.

Secuenciación tradicional de Sanger para reconfirmar la/s mutación/es detectadas en los pacientes diagnosticados con HA, con el fin de obtener un resultado inequívoco, analizando la región concreta donde se encuentra la variante.

En el caso de no identificar ninguna mutación potencial o definitivamente causante de la patología se informará y discutirá con el equipo médico solicitante de la prueba la posibilidad de realizar estudios complementarios.

Valores de referencia

No aplica

Algoritmo diagnóstico:

Según el fenotipo del paciente se incluye:

  • HA grave (FVIII:C<1%) y HA moderada (1%
  • En el caso de ser negativas y en pacientes con diagnóstico de HA leve (5%F8 con la aplicación de un panel de genes relacionados con las coagulopatías congénitas.
  • La/s mutación/es detectadas por NGS en estudios de Hemofilia A, con el objetivo de obtener un resultado inequívoco, serán reconfirmadas por el método de Sanger analizando la región concreta donde se encuentra la mutación.
  • En el caso de no identificar ninguna mutación potencial o definitivamente causante de la patología se informará y discutirá con el equipo médico solicitante de la prueba la posibilidad de realizar estudios complementarios.
Código Nombre de la prueba ¿Se puede solicitar por separado? ¿Se realiza siempre?
LRD2224 Estudio Inversiones F8 (intrón 22; intrón 1) Sí No
LRD2833 Diagnóstico molecular coagulopatías congénitas por NGS Sí No

Tiempo de respuesta:

20 días laborables

Información sobre el espécimen

Muestra: Sangre total
Tubo: Tubo EDTA K3 5-10 ml si se trata de una muestra de sangre
Volumen mínimo imprescindible: 3 ml

Estabilidad:

  • A temperatura ambiente: 4 días
  • En refrigeración: 10 días

Instrucciones de transporte: Preferiblemente a temperatura ambiente

Motivo de rechazo: Muestra coagulada y/o incorrectamente identificada.

Otros tipos de muestras aceptadas:

  • DNA purificado, mínimo 300 ng (30 ng/µL)
  • Mucosa bucal: contactar con el laboratorio para consultar especificaciones de recogida de la muestra.

Información administrativa

Código BST: LRD2833
Descripción de la prueba: Diagnóstico molecular de coagulopatías congénitas por NGS: Hemofilia A.
Sinónimos: Estudio genético de la HA, estudio molecular de la Hemofilia A, secuenciación del F8.
Sección: Coagulopatías Congénitas
Tarifa BST: Consulte las tarifas actualizadas aquí.

En el formulario de solicitud de estudio molecular se debe marcar la casilla HEMO. A y completar los datos fenotípicos de los que se disponga.

Perfiles:

No aplica.

Referencias

  • Peter J Hulick. Next-generation DNA sequencing (NGS): Principles and clinical Applications. Waltham, MA: UpToDate Inc. https://www.uptodate.com

  • DNA Sequencing by Capillary Electrophoresis. Applied Biosystems Chemistry Guide. Second Edition.

Base de dades de mutacions